1. Use columns only in the marked direction.
컬럼은 표시된 방향으로만 사용하라.
2. Always use suitable fittings for the specific column.
해당 컬럼에 맞는 적절한 피팅을 항상 사용하라.
suitable fitting => 물리적으로 정확히 맞는 연결
1) 삽입 깊이 : 튜브가 컬럼 엔드피팅 안쪽 정확한 위치까지 들어가기
2) 데드볼륨 : 튜브 끝–컬럼 frit 사이 빈 공간이 없어야 함
3) 압력 등급 : 컬럼 최대 압력(UHPLC 1000 bar 이상)을 견딜 것
2-1. Columns from different vendors require different fitting dimensions.
vendor [vɛndər] : 제조사
dimension [dɪˈmɛnʃən] : 치수, 길이·깊이·각도 같은 물리적 규격
서로 다른 제조사의 컬럼은 서로 다른 피팅 규격을 요구한다.
=> 제조사마다 컬럼 입구 구조가 달라서, frit 위치, seat 깊이, 콘 각도, 데드볼륨 허용 범위 등이 다르다.
예를 들어, Agilent 컬럼에 맞춘 피팅을 Waters 컬럼에 그대로 사용하면
-> 튜브가 덜 들어가서 frit 앞에 빈 공간(dead volume) 생성
-> peak dispersion(피크 확산), tailing
따라서, 타사 컬럼을 쓸 거면, 그 컬럼에 맞는 피팅을 써야한다는 말
2-2. Using an inappropriate fitting may result in peak dispersion or even damage the column.
dispersion [dɪˈspɜːrʒən] : 분산
band dispersion : 원래는 좁고 뾰족해야 할 시료 밴드가
이동하면서 좌우로 퍼짐 → 결과적으로 피크가 넓어짐
부적절한 피팅을 사용하면 피크 확산이 발생하거나 심지어 컬럼이 손상될 수 있다.
1) 피크확산 : 튜브 끝이 inlet frit에 정확히 닿지 않아
그 사이에 dead volume이 생김 -> 시료가 그 공간에서 확산된 뒤 컬럼에 진입 -> 피크 폭 ↑, 피크 높이 ↓, 분리도(resolution) ↓
2) 컬럼 손상 : 튜브가 과도하게 들어가 inlet frit을 눌러버림
2-3. Agilent recommends using InfinityLab fittings to overcome fitting incompatibilities when using columns from different vendors.
Agilent는 서로 다른 제조사의 컬럼을 사용할 때 발생하는 피팅 비호환성을 해결하기 위해 InfinityLab 피팅 사용을 권장한다.
=> InfinityLab fitting이 해결하는 포인트
1) 자동 삽입 깊이 설정
2) 데드볼륨 최소화
3) 제조사별 치수 차이 흡수
3. Always adhere to operating and application limits, as put forth in the column user guide.
adhere [ədˈhɪər] : 준수하다
forth [fɔːrθ] : (문서·규정에서) 제시된
put forth = 공식 문서에 명확히 적어 놓다
컬럼 사용자 설명서에 제시된 운전 조건과 적용 한계를 항상 준수하라.
4. Equilibrate the column with 10– 20 column volumes before use.
CV = Column Volume
컬럼 내부에 실제로 이동상이 차지하는 총 부피
CV (mL) = π * r² * L * n
r : 컬럼 반지름
L : 컬럼 길이
n : 공극률(보통 0.6–0.7, 일반적으로 0.68 사용 /
어떤 물질의 전체 부피에서 고체 입자를 제외한 빈 공간(공극, pore)이 차지하는 비율)
ex)
1 CV : 컬럼 안에 있던 이동상이 한 번 전부 교체
10 CV : 컬럼 내부 용매가 10번 완전히 바뀜
20 CV : 고정상 표면까지 화학적 평형 도달 가능
사용 전에 컬럼 부피의 10–20배에 해당하는 이동상으로 컬럼을 평형화하라.
4-1. It is advisable to do an intermediate flush with a mobile phase of the correct composition without additives before equilibrating to the final solvent with additives.
첨가제가 포함된 최종 이동상으로 평형화하기 전에, 첨가제가 없는 올바른 조성의 이동상으로 중간 플러시를 수행하는 것이 바람직하다.
=> 첨가제는 컬럼과 시스템에 강하게 남는 물질이기 때문에,
갑자기 바꾸면 침전·흡착·메모리 효과를 일으킬 수 있다.
그래서 무첨가 이동상으로 완충 단계를 거친다.
5. The use of a guard column is recommended to protect your column and increase its lifetime.
컬럼을 보호하고 수명을 늘리기 위해 가드 컬럼 사용을 권장한다.
=> 가드컬럼은 분석컬럼과 동일하거나 유사한 충전제를 가져서 분석컬럼 앞에서 미용해 입자, 결정화된 buffer, 샘플 잔사를 먼저 포집하여 화학적 오염을 막아준다.
NOTE
Long-term storage of columns should always be in the appropriate storing solvent, for more details on the column in use, see the User Guide inserted in the column package.
컬럼의 장기 보관은 항상 적절한 보관 용매에서 해야 하며, 사용 중인 컬럼에 대한 자세한 사항은 컬럼 포장에 동봉된 사용자 설명서를 참고하라.
=> storing solvent : 컬럼을 장기간(며칠~수개월 이상) 사용하지 않을 때, 컬럼 내부를 안정적으로 유지하기 위해 채워 두는 전용 용매
ex) 역상 컬럼 (C18, C8 등) 대표 storing solvent : ACN/Water = 50:50 또는 Methanol/Water = 50:50